手法,你难道有什么创新不成?”
许秋没有回答这个问题。
而是转而提起ProteinG柱粗提法的缺陷,道:“通过传统粗提取提纯出来的总IgG中含有大量非特异性抗体,比如抗食物蛋白抗体,这会直接导致后续交叉反应实验假阳性,导致实验者的严重误判。
“此外,未能够去除的IgG聚合体可能通过空间位阻掩盖真实结合位点。
“再者就是,这种情况下,我们没法验证抗体功能活性。即便是部分变性IgG丧失结合能力,我们也没法发觉。”
简单来说,就是三点。
一个是不够纯,会导致实验结果不精准。
另一个,是太多影响结合的因素,即便是嗜沫凝聚杆菌与血清结合了,也可能会被遮挡住,难以察觉。
而最后一点,就是实验中出了什么问题导致IgG失效甚至是死亡,也没法判断到底是“不结合”,还是“抗体失效”。
这些因素导致的结果是,即便是一路做下来了,最终的ELISA信号也可能来自非目标抗体,误判交叉反应存在!