而对照组,用的则是生理盐水。
处理完毕后,就是进行血脑屏障通透性的动态监测,当然还得监测短链脂肪酸的含量变化。
监测方法,就相对而言比较复杂了。
与常规手法不同,许秋对小鼠进行了颅窗植入。
麻醉小鼠后,颅骨钻窗。
“直径3mm左右,定位在感觉皮层。”
许秋给出详细的位置。
一共16只小鼠,不可能让他一个人慢慢做过来。
太浪费时间。
因而,莫雷蒂、赖光圳等人都参与了进来,共同帮忙处理小鼠。
而完成钻窗过后,就是固定金属观察环、滴加人工脑脊液覆盖了。
至此,这一步处理完成。
随后就是进行荧光示踪剂注射。
相对前者来说,这个操作就很简单了。
直接在尾静脉注射FITC-右旋糖酐标记血管、注射罗丹明B标记细胞外间隙就行了。
没什么技术含量,研究生都能轻松驾驭。
“接下来,需要监测四项指标。”许秋说道。
其一,血脑屏障完整性。
这个很简单,直接用双光子实时成像血管渗漏就行。
第二,紧密连接蛋白Claudin-5。
Claudin-5是神经功能的守门人,从某种方面来说,血脑屏障的完整性与它有着密不可分的关系。
可以说,这个实验的重要指标,基本上都是靠Claudin-5验证的。
而检测Claudin-5本身,则是主要是靠免疫组化+Westernblot(脑微血管)。
随后,是小胶质细胞活化,在皮层进行Iba-1免疫荧光。
最后则是血清血脑屏障修复机制,利用气相色谱-质谱来判断,其涉及到了丁酸、乙酸的浓度,以及至关重要的Claudin-5基因敲除!
“这个方案……也做出了很多优化啊。”莫雷蒂有些愕然。
赖光圳等人也不禁点头,目中有着钦佩之色。
许秋的方法,和常规法子比起来,优势大上不少。
比如检验血脑屏障的完整性这一点。
常规手法,是监测分辨菌群的丰度。
而许秋则改换成了双光子实时成像血管渗漏,优点显而易见,便是可以动态观测血脑屏障修复过程。
其次,短链脂肪酸修复血脑屏障这一点,许秋对Claudin-5基因的敲除,堪称妙笔。
没有了Claudin-5基因,小
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